Tankyrase-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400749-ACT

TNKS codifica a tankirase-1, uma poli(ADP-ribose) polimerase que regula o turnover de proteínas e funções de andaime por meio do recrutamento de ligases de ubiquitina dependente de PARilação. A tankirase-1 modula a sinalização Wnt/β-catenina ao direcionar a AXIN para degradação, e também contribui para a manutenção dos telômeros, a progressão mitótica e as respostas a dano no DNA por meio de interações com TRF1 e outros fatores de reparo e do centrossomo. Ao influenciar a estabilidade do genoma e a sinalização proliferativa, TNKS é frequentemente estudado em contextos de desregulação de vias oncogênicas e instabilidade cromossômica. Sua ampla rede de substratos o torna um nó útil para investigar a comunicação cruzada entre a biologia de PARP, a proteostase mediada por ubiquitina e o controle do ciclo celular.

Tankyrase-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNKS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tankyrase-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNKS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNKS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tankyrase-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNKS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tankyrase-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tankyrase-1 em células tumorais com expressão de TNKS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.