Plasmide CRISPR/Cas9 KO TALL-1 (h): sc-406502

Présentation

TNFSF13B code pour TALL-1 (également appelé BAFF), une cytokine de la superfamille du TNF essentielle à la survie et à la maturation des lymphocytes B, ainsi qu’à la production d’immunoglobulines. TALL-1 transmet ses signaux via des récepteurs tels que BAFF-R, TACI et BCMA afin d’activer NF-κB et des voies de survie associées, modulant ainsi l’homéostasie des lymphocytes B périphériques et les réponses immunitaires humorales. Une expression ou une signalisation de TNFSF13B dérégulée est associée à une tolérance des lymphocytes B altérée et à une persistance aberrante des plasmocytes, reliant cet axe à une activation immunitaire liée à l’auto-immunité et à des états inflammatoires médiés par les lymphocytes B. En tant que ligand à la fois soluble et associé à la membrane, TALL-1 influence également la communication entre cellules immunitaires au sein des tissus lymphoïdes et des microenvironnements inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TALL-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TNFSF13B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TNFSF13B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TNFSF13B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TALL-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TNFSF13B pour l'étude de la signalisation de TALL-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TNFSF13B essentiels à la fonction de TALL-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TNFSF13B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TALL-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TALL-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TNFSF13B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TALL-1 plasmide HDR (h) et le TALL-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TNFSF13B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TNFSF13B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.