TAF II p250 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402218-ACT

TAF1は、RNAポリメラーゼIIのプレイニシエーション複合体の形成を開始（核形成）し、TBPや他のTAFとの相互作用を介してプロモーター認識を支えるTFIID複合体の中核サブユニットであるTAF II p250をコードします。基礎転写の中心的な足場因子として、TAF1は細胞周期の進行、DNA損傷応答、クロマチン関連の転写制御を司るグローバルな遺伝子発現プログラムを形作る調節入力を統合します。TAF1機能の攪乱は転写ネットワークの破綻と関連し、神経系の遺伝子制御に広く必要とされることを反映して、神経発達および神経変性の表現型にも関与すると示唆されています。これらの特性により、TAF1はヒト細胞における転写開始、プロモーター構造、疾患関連の遺伝子発現状態を研究するうえで重要な結節点となります。

TAF II p250 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TAF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TAF II p250 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TAF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTAF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TAF II p250の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTAF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTAF II p250依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTAF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTAF II p250経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。