TAF II p135 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404230

Übersicht

TAF4 kodiert TAF II p135, eine zentrale Untereinheit des TFIID-Komplexes, der zusammen mit TBP und anderen TAFs die Initiation der RNA-Polymerase-II-abhängigen Transkription ermöglicht. Über Interaktionen mit sequenzspezifischen Transkriptionsfaktoren und chromatinassoziierten Regulatoren trägt TAF II p135 zur Promotorerkennung, zur Assemblierung des Präinitiationskomplexes und zur Kontrolle zellzustandsabhängiger Genexpressionsprogramme bei. Die Funktion von TAF4 ist eng mit Chromatin-Remodeling und Netzwerken von transkriptionellen Koaktivatoren verknüpft und steht damit in Zusammenhang mit der Regulation von Proliferation, Differenzierung und stressresponsiver Transkription. Fehlregulierte TFIID/TAF-Aktivität und eine veränderte Transkriptionsinitiation werden häufig im Kontext onkogener transkriptioneller Reprogrammierung und anderer Störungen der Genregulation untersucht.

Das TAF II p135 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TAF4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TAF4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TAF4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TAF II p135-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TAF4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TAF II p135-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TAF4-Exone abzielen, die für die TAF II p135-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TAF4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TAF II p135 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TAF II p135 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TAF4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TAF II p135 HDR-Plasmid (h) und TAF II p135 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TAF4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TAF4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.