TAF I p63 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404427-ACT

TAF1B codifica a TAF I p63, um componente central do complexo SL1 necessário para o início da transcrição pela RNA polimerase I em promotores de DNA ribossômico. Ao sustentar a síntese de pré-rRNA e a biogênese de ribossomos, a TAF I p63 contribui para a função nucleolar, o controle do crescimento celular e a coordenação da proteostase com a demanda metabólica. A regulação da transcrição de rDNA dependente de TAF1B interage com vias responsivas ao estresse que modulam a integridade do nucléolo e a progressão do ciclo celular. A regulação alterada da transcrição pela Pol I e da biogênese ribossomal tem sido associada a estados proliferativos e a fenótipos ligados a ribossomopatias, tornando TAF1B um alvo útil para estudos mecanísticos da biologia do nucléolo e do controle transcricional.

TAF I p63 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TAF1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAF I p63 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TAF1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TAF1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAF I p63. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TAF1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAF I p63 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAF I p63 em células tumorais com expressão de TAF1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.