TACC3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402461-ACT

O TACC3 humano (transforming acidic coiled-coil containing protein 3) é um fator associado ao centrossomo e ao fuso mitótico que coordena a dinâmica dos microtúbulos para sustentar a montagem do fuso mitótico, a segregação cromossômica e uma progressão fiel do ciclo celular. Por meio de interações com parceiros como clatrina e chTOG, o TACC3 contribui para a estabilização dos microtúbulos e para a integridade do fuso, vinculando sua função ao controle do checkpoint mitótico e à estabilidade genômica. A expressão desregulada ou rearranjos de TACC3 têm sido observados em múltiplos contextos tumorais e são frequentemente estudados em relação à sinalização proliferativa, à instabilidade cromossômica e a programas mitóticos alterados. Essas propriedades tornam o TACC3 um nó útil para investigar a biologia da divisão celular, mecanismos de aneuploidia e dependências de vias associadas à proliferação rápida.

TACC3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TACC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TACC3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TACC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TACC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TACC3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TACC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TACC3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TACC3 em células tumorais com expressão de TACC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.