T1R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402555

概要

TAS1R2は、甘味受容体サブユニットT1R2をコードするクラスCのGPCRであり、T1R3とヘテロ二量体を形成して糖や甘味料を検知し、リガンド結合を細胞内のセカンドメッセンジャーシグナル伝達へと結び付けます。味蕾細胞にとどまらず、T1R2/T1R3シグナルは腸管内分泌細胞など他の化学感覚の場でも報告されており、栄養素の感知や、それに続くホルモン応答・代謝応答に影響し得ます。受容体活性化は一般に、Gタンパク質、PLCβ2、細胞内Ca²⁺動員を介するGPCR経路と関連し、細胞種に応じて下流のMAPKや転写プログラムに至ります。TAS1R2の発現変化やバリアントは、代謝表現型、食行動、グルコース恒常性との関連で検討されており、栄養応答性シグナル伝達ネットワークの研究における重要性が示されています。

T1R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTAS1R2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TAS1R2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TAS1R2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、T1R2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、T1R2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TAS1R2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• T1R2の機能に不可欠なTAS1R2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TAS1R2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• T1R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびT1R2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TAS1R2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  T1R2 HDRプラスミド（h）および T1R2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTAS1R2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTAS1R2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。