T1R2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402555-ACT

ヒトTAS1R2は、甘味受容体サブユニットT1R2をコードするクラスCのGPCRであり、TAS1R3とヘテロ二量体を形成して糖や甘味料を検知します。口腔での味覚認知にとどまらず、T1R2は腸や膵臓などの口腔外組織における栄養素センシングにも関与し、GPCRを介したセカンドメッセンジャー経路を通じて、グルコース依存性のシグナル伝達、ホルモン分泌、ならびに代謝恒常性に影響を及ぼします。TAS1R2の発現やシグナルの変化は、エネルギーバランスやグルコース処理の破綻との関連で検討されており、代謝性疾患研究において関連性が報告されています。栄養素センシング受容体としてのT1R2は、受容体のトラフィッキング、ヘテロ二量体化、ならびに炭水化物刺激に対する下流の転写応答を研究するための扱いやすいモデルを提供します。

T1R2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TAS1R2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

T1R2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TAS1R2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTAS1R2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性T1R2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTAS1R2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるT1R2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTAS1R2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるT1R2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。