T-type Ca⁺⁺ CP α1I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403786-ACT

CACNA1I codifica a subunidade α1I do canal de cálcio tipo T CaV3.3, uma proteína formadora de poro ativada a baixos potenciais que medeia um influxo transitório de Ca2+ próximo aos potenciais de membrana de repouso. Ao moldar despolarizações sub-limiar e disparos em rajada de rebote, o CaV3.3 contribui para a excitabilidade neuronal, o disparo rítmico e a sinalização dependente de Ca2+ que acopla a atividade de membrana a programas de transcrição e de plasticidade sináptica. A atividade de CACNA1I se cruza com vias que controlam a dinâmica do potencial de membrana, a homeostase do cálcio intracelular e a regulação gênica dependente de atividade em tecidos excitáveis. Estudos genéticos e funcionais têm implicado variações ou desregulação de CACNA1I em fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, sustentando sua relevância para trabalhos mecanísticos sobre oscilações em nível de circuito e excitabilidade celular.

T-type Ca++ CP α1I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CACNA1I sem alterar a sequência de ADN subjacente.

T-type Ca++ CP α1I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CACNA1I em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CACNA1I, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de T-type Ca++ CP α1I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CACNA1I nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de T-type Ca++ CP α1I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via T-type Ca++ CP α1I em células tumorais com expressão de CACNA1I silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.