T-type Ca⁺⁺ CP α1H CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401147

概要

CACNA1Hは、CaV3.2型T型カルシウムチャネルの孔形成サブユニットであるα1Hをコードしており、低電位で活性化されるCa2+流入を介して、膜興奮性、ペースメーカー活動、ならびにカルシウム依存的な遺伝子発現制御を形作ります。閾値下振動と細胞内Ca2+トランジェントを制御することで、CaV3.2は神経伝達物質放出、ホルモン分泌、活動依存的な転写プログラムに影響するシグナル伝達過程に組み込まれています。CACNA1H機能の変化は、てんかん感受性、神経障害性疼痛の機序、心拍リズム表現型など、興奮性異常に関わる疾患との関連が示唆されており、がん細胞の増殖・生存の文脈でも研究されています。興奮性シグナル伝達ネットワークにおける結節点（ノード）となるイオンチャネルとして、CACNA1Hは、カルシウム流入依存性の経路やチャネル群（チャネローム）のリモデリングを解明するために、しばしば解析対象となります。

T-type Ca++ CP α1H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCACNA1H遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CACNA1H内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CACNA1Hのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、T-type Ca++ CP α1Hタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、T-type Ca++ CP α1Hシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CACNA1H欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• T-type Ca++ CP α1Hの機能に不可欠なCACNA1Hエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CACNA1Hゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• T-type Ca++ CP α1H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびT-type Ca++ CP α1H CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CACNA1H遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  T-type Ca++ CP α1H HDRプラスミド（h）および T-type Ca++ CP α1H HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCACNA1Hホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCACNA1H標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。