T-type Ca⁺⁺ CP α1G Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418331-ACT

CACNA1G codifica a subunidade α1G, formadora do poro, do canal de Ca++ tipo T Cav3.1, uma condutância ativada por baixas voltagens que sustenta correntes de janela e a despolarização rítmica da membrana. Ao modular transientes de cálcio intracelular próximos aos potenciais de repouso, o Cav3.1 influencia a excitabilidade neuronal, a atividade marcapasso e cascatas de sinalização dependentes de cálcio que acoplam a atividade de membrana à regulação gênica e à função sináptica. A atividade de CACNA1G integra-se a redes mais amplas de homeostase de Ca2+ e vias de excitabilidade, incluindo quinases dependentes de cálcio e programas transcricionais responsivos ao potencial de membrana. A disfunção de canais de cálcio tipo T tem sido associada na literatura a alterações nas oscilações tálamo-corticais e a fenótipos de excitabilidade relevantes para mecanismos de doenças neurológicas e neuropsiquiátricas.

T-type Ca++ CP α1G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CACNA1G sem alterar a sequência de ADN subjacente.

T-type Ca++ CP α1G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CACNA1G em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CACNA1G, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de T-type Ca++ CP α1G. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CACNA1G nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de T-type Ca++ CP α1G no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via T-type Ca++ CP α1G em células tumorais com expressão de CACNA1G silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.