T-FABP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423411

Visão geral

Fabp9 codifica a proteína ligadora de ácidos graxos do testículo (T-FABP), uma chaperona lipídica implicada no tráfego intracelular de ácidos graxos de cadeia longa e de outros ligantes hidrofóbicos na linhagem germinativa masculina. Ao regular a captação, o sequestro e a entrega de ácidos graxos a enzimas metabólicas e membranas, a T-FABP está ligada a vias de homeostase lipídica que influenciam a β-oxidação mitocondrial, a remodelação de membranas e o equilíbrio redox durante a espermatogênese. Alterações na atividade da família FABP são amplamente associadas à desregulação metabólica e à sinalização inflamatória, e o Fabp9 é comumente estudado no contexto do desenvolvimento espermático, da motilidade e de fenótipos relacionados à fertilidade. Em modelos murinos, o Fabp9 fornece um ponto de análise acessível para investigar como o manejo de lipídios pelas células germinativas impacta a biologia reprodutiva e a adaptação metabólica responsiva ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO T-FABP (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Fabp9 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Fabp9, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Fabp9 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína T-FABP.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Fabp9 para a investigação da sinalização de T-FABP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Fabp9 críticos para a função T-FABP
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Fabp9 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo T-FABP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo T-FABP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Fabp9. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo T-FABP Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR T-FABP (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Fabp9 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Fabp9 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.