Plásmido CRISPR de Activación (h) T-bet/TBX21: sc-400480-ACT

TBX21 codifica T-bet, un factor de transcripción de la familia T-box que actúa como regulador maestro de la diferenciación inmunitaria de tipo 1. T-bet integra señales de citocinas y del TCR para moldear la accesibilidad de la cromatina y los programas transcripcionales que controlan IFNG y otros genes asociados a Th1, influyendo en la maduración de las células NK y en la función efectora citotóxica. Mediante interacciones de regulación cruzada con factores definidores de linaje, TBX21 ayuda a equilibrar la polarización Th1 frente a Th2/Th17 y coordina respuestas aguas abajo de las vías IL-12/STAT4 e IFN/STAT1. La actividad desregulada de TBX21 se ha asociado con inflamación mediada por el sistema inmunitario, susceptibilidad a infecciones y una vigilancia inmunitaria antitumoral alterada, lo que lo convierte en un nodo valioso para estudios mecanísticos de inmunopatología.

T-bet/TBX21 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TBX21 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

T-bet/TBX21 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TBX21 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TBX21, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de T-bet/TBX21. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TBX21 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de T-bet/TBX21 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía T-bet/TBX21 en células tumorales con expresión de TBX21 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.