Syntaphilin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403784-ACT

O SNPH humano codifica a sintafilina, uma proteína de ancoragem mitocondrial que imobiliza mitocôndrias axonais ao acoplá-las ao citoesqueleto de microtúbulos. Ao restringir a motilidade mitocondrial, a sintafilina ajuda a ajustar a disponibilidade local de ATP e o tamponamento de Ca²⁺ em sítios pré-sinápticos, conectando a dinâmica mitocondrial à manutenção sináptica e à plasticidade dependente de atividade. A função de SNPH se cruza com vias que regulam o transporte axonal, o controle de qualidade mitocondrial e as respostas neuronais ao estresse, tornando-o relevante para estudos de neurodegeneração e outros distúrbios em que a distribuição mitocondrial e a homeostase bioenergética estão alteradas. A regulação alterada do tráfego mitocondrial é frequentemente investigada em modelos de lesão neuronal e proteinopatias, posicionando o SNPH como um nó mecanístico para estudar a vulnerabilidade de circuitos.

Syntaphilin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNPH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Syntaphilin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNPH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNPH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Syntaphilin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNPH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Syntaphilin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Syntaphilin em células tumorais com expressão de SNPH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.