Synaptotagmin IV Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403314-ACT

SYT4 codifica a sinaptotagmina IV, uma proteína de domínio C2 associada à membrana que se localiza em vesículas secretórias e modula a exocitose dependente de Ca²⁺ em neurônios e outras células excitáveis. Ao contrário das sinaptotagminas canônicas que atuam como sensores rápidos de Ca²⁺, a sinaptotagmina IV é frequentemente relacionada ao ajuste dependente de atividade da probabilidade de fusão vesicular, à plasticidade sináptica e à liberação regulada de neuropeptídeos e neurotransmissores. A função de SYT4 se cruza com a fusão de membranas mediada por SNARE, o tráfego vesicular e as vias de acoplamento estímulo-secreção que influenciam a adaptação de redes neuronais. Alterações na expressão ou na regulação da maquinaria de liberação vesicular, incluindo SYT4, têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos e são estudadas no contexto de disfunção sináptica.

Synaptotagmin IV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SYT4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Synaptotagmin IV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SYT4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SYT4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Synaptotagmin IV. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SYT4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Synaptotagmin IV no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Synaptotagmin IV em células tumorais com expressão de SYT4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.