Synapsin Ia/b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401064-ACT

O SYN1 codifica a sinapsina Ia/b, uma fosfoproteína enriquecida em neurônios que se associa a vesículas sinápticas e a filamentos de actina para regular o agrupamento de vesículas, a manutenção do pool de reserva e a liberação de neurotransmissores dependente da atividade. A função da sinapsina Ia/b é controlada por fosforilação a jusante de sinalização dependente de Ca2+ e das vias cAMP/PKA e MAPK, acoplando a atividade neuronal à mobilização de vesículas pré-sinápticas e à plasticidade sináptica. Pelo seu papel em moldar a eficácia pré-sináptica e a excitabilidade da rede, alterações na regulação de SYN1 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, incluindo epilepsia e transtorno do espectro do autismo, sendo frequentemente estudadas em modelos de disfunção sináptica.

Synapsin Ia/b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SYN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Synapsin Ia/b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SYN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SYN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Synapsin Ia/b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SYN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Synapsin Ia/b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Synapsin Ia/b em células tumorais com expressão de SYN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.