Swiprosin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404763-ACT

EFHD2 codifica a Swiprosin-1, uma proteína adaptadora ligante de cálcio implicada na remodelação dinâmica do citoesqueleto de actina e na coordenação da transdução de sinais na membrana plasmática. A Swiprosin-1 tem sido associada a processos como espalhamento celular, adesão e motilidade, em consonância com papéis na sinalização dependente de cálcio e na organização do citoesqueleto. Em contextos imunes e neuronais, a regulação de estados de ativação celular associada a EFHD2 tem sido estudada em relação à sinalização inflamatória e à função sináptica ou axonal. Padrões alterados de expressão de EFHD2 foram relatados em diversos cenários relevantes para doenças, sustentando sua utilidade como um nó molecular para dissecar vias que acoplam o fluxo de cálcio a respostas citoesqueléticas e transcricionais.

Swiprosin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EFHD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Swiprosin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EFHD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EFHD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Swiprosin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EFHD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Swiprosin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Swiprosin-1 em células tumorais com expressão de EFHD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.