survivin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400205-ACT

BIRC5 codifica a survivina, uma proteína inibidora de apoptose multifuncional que também atua como componente central do complexo passageiro cromossômico, coordenando a progressão mitótica, a segregação cromossômica e a citocinese. A survivina integra sinais que regulam o controle de checkpoints do ciclo celular e a sobrevivência celular, modulando a atividade das caspases e a dinâmica do fuso mitótico. A expressão desregulada de BIRC5 é frequentemente associada a proliferação elevada e resistência à apoptose, tornando-a amplamente utilizada como marcador molecular em estudos de sinalização oncogênica, estabilidade genômica e vias de resposta ao estresse. Como gene humano com forte dependência do ciclo celular, BIRC5 fornece um ponto de investigação acessível para analisar programas transcricionais ligados à mitose e redes de proteostase em diversos modelos celulares.

survivin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BIRC5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

survivin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BIRC5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BIRC5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de survivin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BIRC5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de survivin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via survivin em células tumorais com expressão de BIRC5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.