SURF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423219

概要

Surf1は、電子伝達系におけるシトクロムcオキシダーゼ（複合体IV）の適切な組み立てに必須な、進化的に保存されたミトコンドリア内膜タンパク質SURF-1をコードする。複合体IVの生合成を統括することで、SURF-1は酸化的リン酸化、ミトコンドリア膜電位の維持、ならびに効率的な細胞内ATP産生を支える。SURF1機能の破綻は、ミトコンドリア複合体IV欠損およびLeigh症候群様の神経変性表現型と関連しており、高エネルギー需要組織における重要性を示している。マウス系では、Surf1の改変は、ミトコンドリアのプロテオスタシス、呼吸鎖の再編成、ならびに生体エネルギー不全に伴うストレス応答性シグナル伝達を解析するために広く用いられている。

SURF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSurf1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Surf1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Surf1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SURF-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SURF-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Surf1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SURF-1の機能に不可欠なSurf1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Surf1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SURF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSURF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Surf1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SURF-1 HDRプラスミド（m）および SURF-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSurf1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSurf1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。