Superoxide Dismutase 2/SOD2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400230-ACT

A SOD2 humana codifica a superóxido dismutase mitocondrial dependente de manganês, que converte radicais superóxido em peróxido de hidrogênio e oxigênio, constituindo uma defesa antioxidante primária na matriz mitocondrial. Ao limitar o dano oxidativo ao DNA mitocondrial, às proteínas e aos lipídios, a SOD2 ajuda a preservar a função da cadeia respiratória e sustenta a homeostase redox celular, a adaptação ao estresse e a sinalização apoptótica. A atividade da SOD2 integra-se a vias sensíveis a EROs, incluindo programas antioxidantes mediados por NRF2, sinalização inflamatória e processos de controle de qualidade mitocondrial, como a mitofagia. Alterações na expressão ou na função da SOD2 estão associadas a fenótipos de estresse oxidativo observados na biologia do câncer, na neurodegeneração, na disfunção cardiometabólica e em modelos de doenças inflamatórias, tornando-a um alvo comum para estudos mecanísticos de EROs mitocondriais.

Superoxide Dismutase 2/SOD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Superoxide Dismutase 2/SOD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Superoxide Dismutase 2/SOD2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Superoxide Dismutase 2/SOD2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Superoxide Dismutase 2/SOD2 em células tumorais com expressão de SOD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.