Plásmido CRISPR de Activación (h) Superoxide Dismutase 2/SOD2: sc-400230-ACT

El gen humano SOD2 codifica la superóxido dismutasa mitocondrial de manganeso, que convierte los radicales superóxido en peróxido de hidrógeno y oxígeno, constituyendo una defensa antioxidante primaria dentro de la matriz mitocondrial. Al limitar el daño oxidativo al ADN mitocondrial, las proteínas y los lípidos, SOD2 ayuda a preservar la función de la cadena respiratoria y favorece la homeostasis redox celular, la adaptación al estrés y la señalización apoptótica. La actividad de SOD2 se integra con vías sensibles a las ROS, incluidos los programas antioxidantes mediados por NRF2, la señalización inflamatoria y los procesos de control de calidad mitocondrial como la mitofagia. La expresión o función alteradas de SOD2 se asocian con fenotipos de estrés oxidativo observados en la biología del cáncer, la neurodegeneración, la disfunción cardiometabólica y modelos de enfermedades inflamatorias, lo que la convierte en una diana frecuente para estudios mecanísticos de las ROS mitocondriales.

Superoxide Dismutase 2/SOD2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SOD2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Superoxide Dismutase 2/SOD2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SOD2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SOD2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Superoxide Dismutase 2/SOD2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SOD2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Superoxide Dismutase 2/SOD2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Superoxide Dismutase 2/SOD2 en células tumorales con expresión de SOD2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.