SUMO-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400788

Panoramica

SUMO3 codifica SUMO-3, un piccolo modificatore ubiquitina-simile che viene coniugato covalentemente alle proteine bersaglio per regolarne la localizzazione, la stabilità e le reti di interazione. La SUMOilazione dipendente da SUMO-3 sostiene il controllo dinamico della trascrizione, della segnalazione e riparazione del danno al DNA, dell’organizzazione della cromatina e della progressione del ciclo cellulare, e si interseca con le vie dell’ubiquitina per modulare una proteostasi adattativa allo stress. L’attività di SUMO3 è spesso studiata nel contesto delle risposte cellulari allo stress, del mantenimento dell’integrità del genoma e della regolazione dell’immunità innata, dove pattern di SUMOilazione alterati sono stati collegati a una segnalazione deregolata in oncologia, allo stress proteotossico associato a neurodegenerazione e alla fisiopatologia infiammatoria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SUMO-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SUMO3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SUMO3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SUMO3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SUMO-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SUMO3 per lo studio della segnalazione di SUMO-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SUMO3 critici per la funzione di SUMO-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SUMO3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SUMO-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SUMO-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SUMO3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SUMO-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SUMO-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SUMO3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SUMO3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.