SUMO-2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-431342-ACT

Mouse Sumo2 kodiert SUMO-2, einen ubiquitinähnlichen Modifikator, der kovalent an Lysinreste von Zielproteinen konjugiert wird, um deren Lokalisation, Stabilität und Protein-Protein-Interaktionen zu regulieren. Die SUMO-2/3-Konjugation wird durch zellulären Stress rasch ausgelöst und koordiniert die nukleäre Organisation, die Signalgebung und Reparatur bei DNA-Schäden, das Chromatin-Remodeling, die transkriptionelle Kontrolle sowie die Progression des Zellzyklus. Durch dynamische SUMOylierung und deSUMOylierung moduliert SUMO-2 Signalwege, darunter Genomstabilität, Proteostase und angeborene Stressantworten. Eine fehlregulierte SUMO-2-abhängige Modifikation wurde mit veränderten Antworten auf genotoxischen Stress, aberranten Transkriptionsprogrammen und krankheitsrelevanten Phänotypen in Modellen der Krebsbiologie und Neurodegeneration in Verbindung gebracht.

SUMO-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Sumo2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SUMO-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Sumo2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Sumo2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SUMO-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Sumo2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SUMO-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SUMO-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Sumo2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.