SULT1A3/1A4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417169-ACT

SULT1A4 codifica uma sulfotransferase citosólica que, em conjunto com a isoforma altamente homóloga SULT1A3, catalisa a conjugação por sulfatação de catecolaminas e de outros substratos fenólicos, aumentando a sua solubilidade e modulando a biodisponibilidade. A atividade de SULT1A3/1A4 integra-se no metabolismo de xenobióticos de fase II e na homeostase de neurotransmissores, moldando as respostas celulares ao stresse oxidativo e à exposição a agentes químicos. Em tecidos com elevada renovação de catecolaminas, alterações na expressão podem influenciar o processamento de monoaminas e a sinalização a jusante, sendo frequentemente analisadas no contexto de diferenças interindividuais no metabolismo de fármacos e na sensibilidade a substâncias químicas. Como SULT1A3 e SULT1A4 partilham semelhança de sequência e perfis de substratos sobrepostos, este locus também é utilizado para estudar a regulação específica de isoformas e a compensação nas vias de sulfatação.

SULT1A3/1A4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SULT1A4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SULT1A3/1A4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SULT1A4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SULT1A4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SULT1A3/1A4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SULT1A4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SULT1A3/1A4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SULT1A3/1A4 em células tumorais com expressão de SULT1A4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.