Su[fu] Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423973

Visão geral

O gene suppressor of fused (Sufu) codifica a proteína Su(fu), um importante regulador negativo da sinalização Hedgehog que restringe a atividade dos fatores de transcrição GLI e ajuda a controlar programas transcricionais que governam o padrão embrionário, a especificação do destino celular e a homeostase tecidual. Em células de camundongo, a SUFU atua como um arcabouço citoplasmático que sequestra proteínas GLI e coordena seu processamento e acesso ao núcleo, integrando-se à dinâmica da via Hedgehog dependente do cílio primário. Alterações em Sufu podem deslocar a saída da via e a expressão gênica a jusante, tornando-o relevante para estudar a lógica da sinalização do desenvolvimento e fenótipos celulares dirigidos por Hedgehog. A função alterada de SUFU tem sido associada à desregulação da sinalização Hedgehog em modelos relacionados a doenças, sustentando seu uso como um nó mecanístico para investigar a via.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Su[fu] (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sufu em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sufu, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sufu na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Su[fu].

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sufu para a investigação da sinalização de Su[fu], estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sufu críticos para a função Su[fu]
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sufu para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Su[fu] Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Su[fu] Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sufu. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Su[fu] Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Su[fu] (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sufu para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sufu definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.