STRAD CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402311-ACT

STRADAは、触媒活性を持たない擬似キナーゼSTRADをコードしており、STRADはLKB1（STK11）および足場タンパク質MO25と複合体を形成して、LKB1の細胞質局在と活性化を促進します。この複合体を介して、STRADはAMPK関連キナーゼシグナル伝達に影響するリン酸化カスケードを支え、細胞のエネルギー感知、極性、増殖制御に関与するとともに、細胞骨格の構築やストレス応答などのプロセスにも下流で影響を及ぼします。STRADAの破綻や制御異常は、神経発生関連の表現型や、増殖・遊走生物学で頻繁に研究される経路と交差するシグナルネットワークの破綻と関連づけられています。そのため、STRADは、キナーゼの足場形成、細胞内局在、文脈依存的な転写プログラムを結び付ける制御ノードとして、一般に研究対象となっています。

STRAD CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STRADAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

STRAD CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STRADA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTRADA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性STRADの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTRADA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSTRAD依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTRADA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSTRAD経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。