STOX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407515-ACT

STOX1 (storkhead box 1) codifica um fator de transcrição do tipo hélice-alada que se liga ao DNA e modula programas gênicos que controlam decisões de destino celular, diferenciação e transcrição responsiva ao estresse. Em tecidos humanos, o STOX1 tem sido implicado na regulação da função do trofoblasto e no desenvolvimento placentário, com associações relatadas a redes transcricionais alteradas envolvidas em invasão, manejo do estresse oxidativo e sinalização inflamatória. A desregulação da expressão de STOX1 tem sido associada a distúrbios relacionados à gestação, incluindo a pré-eclâmpsia, e também é estudada por possíveis papéis em vias de neurodesenvolvimento e neurodegeneração por meio de efeitos na expressão gênica neuronal. Como regulador transcricional, o STOX1 oferece um ponto de entrada útil para dissecar circuitos regulatórios a montante e genes-alvo a jusante em diferentes modelos celulares.

STOX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STOX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

STOX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STOX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STOX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de STOX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STOX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de STOX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via STOX1 em células tumorais com expressão de STOX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.