Stim1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401311

Visão geral

STIM1 codifica a molécula de interação estromal 1 (Stim1), um sensor de Ca2+ do retículo endoplasmático que inicia a entrada de cálcio operada por depleção dos estoques ao acoplar a depleção de Ca2+ no RE à ativação dos canais ORAI nas junções entre o RE e a membrana plasmática. Esse influxo de Ca2+ regula a transcrição dependente de NFAT, a remodelação do citoesqueleto, a secreção e redes mais amplas de sinalização dependente de cálcio que controlam a proliferação e as respostas ao estresse. Vias dependentes de STIM1 são centrais para a ativação de células imunes e para outras funções de células excitáveis e não excitáveis, ligando alterações na homeostase de cálcio a fenótipos imunológicos e a outras fisiopatologias. Na biologia das doenças humanas, a sinalização desregulada de STIM1 é frequentemente estudada no contexto de entrada aberrante de Ca2+ e de programas transcricionais a jusante que impactam decisões de estado celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Stim1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene STIM1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do STIM1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do STIM1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Stim1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de STIM1 para a investigação da sinalização de Stim1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) STIM1 críticos para a função Stim1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos STIM1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Stim1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Stim1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus STIM1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Stim1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Stim1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia STIM1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo STIM1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.