Stim1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423189-ACT

O Stim1 de camundongo (stromal interaction molecule 1) é um sensor de Ca²⁺ do retículo endoplasmático que acopla a depleção dos estoques de Ca²⁺ do RE à entrada de cálcio operada por estoques (SOCE), por meio do recrutamento/ativação de canais ORAI nas junções entre o RE e a membrana plasmática. Esse eixo de sinalização sustenta um influxo citosólico de Ca²⁺ prolongado, necessário para programas transcricionais dependentes de cálcio, adaptação metabólica e secreção regulada em muitos tipos celulares. A SOCE mediada por Stim1 interage com vias que controlam a ativação de células imunes, a função muscular e a excitabilidade neuronal por meio de efetores a jusante, como a sinalização calcineurina–NFAT e MAPK. A atividade desregulada de STIM1 e a homeostase de Ca²⁺ são amplamente usadas como conexões experimentais a fenótipos inflamatórios, miopatias e distúrbios associados à neurofisiologia em modelos murinos mecanísticos.

Stim1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Stim1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Stim1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Stim1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Stim1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Stim1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Stim1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Stim1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Stim1 em células tumorais com expressão de Stim1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.