stefin A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423187

概要

Stfa2は、カテプシンなどのパパイン様システインプロテアーゼを阻害する細胞質タンパク質である、マウスのシスタチンファミリータンパク質ステフィンA2をコードします。ステフィンA2はプロテアーゼ活性を抑制することで、細胞内タンパク質分解、リソソームおよびエンドリソソームにおけるタンパク質代謝回転の調節に寄与し、ストレスや炎症時にプロテアーゼによって引き起こされる損傷から細胞を保護します。システインプロテアーゼとその阻害因子のバランスの変化は、抗原プロセシング、上皮バリアの維持、組織リモデリングを制御する経路と関連します。このプロテアーゼ—阻害因子軸の制御異常は、炎症性表現型や、カテプシン活性が浸潤および微小環境のリモデリングに影響するがん関連プロセスに関与すると報告されています。

stefin A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるStfa2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Stfa2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Stfa2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、stefin A2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、stefin A2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Stfa2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• stefin A2の機能に不可欠なStfa2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Stfa2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• stefin A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびstefin A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Stfa2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  stefin A2 HDRプラスミド（m）および stefin A2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはStfa2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のStfa2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。