Plasmide CRISPR d'Activation (m) STC1: sc-423182-ACT

La stanniocalcine 1 (STC1), codée par le gène murin *Stc1*, est une hormone glycoprotéique sécrétée impliquée dans l’homéostasie du calcium et du phosphate, ainsi que dans des voies de signalisation plus larges d’adaptation au stress. STC1 est régulée par des programmes associés à l’hypoxie et à l’inflammation et a été liée à la modulation de la fonction mitochondriale, des réponses au stress oxydatif et des voies de survie cellulaire. Dans divers tissus, STC1 influence des processus angiogéniques, métaboliques et immunitaires, ce qui la rend pertinente pour l’étude des lésions ischémiques, de la fibrose et du remodelage du microenvironnement tumoral. Une expression altérée de STC1 a été observée dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour disséquer les interactions entre voies de signalisation du stress et homéostasie tissulaire.

STC1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Stc1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

STC1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Stc1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Stc1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de STC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Stc1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de STC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie STC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Stc1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.