STC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423182-ACT

A estaniocalcina 1 (STC1), codificada pelo gene murino *Stc1*, é um hormônio glicoproteico secretado implicado na homeostase de cálcio e fosfato e em uma sinalização mais ampla de adaptação ao estresse. A STC1 é regulada por programas associados à hipóxia e à inflamação e tem sido relacionada à modulação da função mitocondrial, das respostas ao estresse oxidativo e de vias de sobrevivência celular. Em diversos tecidos, a STC1 influencia processos angiogênicos, metabólicos e relacionados ao sistema imune, tornando-se relevante para estudos de lesão isquêmica, fibrose e remodelamento do microambiente associado a tumores. Alterações na expressão de STC1 foram observadas em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como um nó mecanístico para dissecar a conversa cruzada entre vias de sinalização de estresse e a homeostase tecidual.

STC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Stc1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

STC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Stc1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Stc1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de STC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Stc1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de STC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via STC1 em células tumorais com expressão de Stc1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.