Stat6 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423180-ACT

Stat6 del topo (signal transducer and activator of transcription 6) è un fattore di trascrizione responsivo alle citochine, attivato a valle della segnalazione dei recettori di IL-4 e IL-13 tramite le chinasi JAK, con conseguente fosforilazione su tirosina, dimerizzazione e traslocazione nel nucleo. STAT6 guida programmi genici associati alla polarizzazione Th2, all’attivazione alternativa (tipo M2) dei macrofagi, allo switch di classe delle cellule B, alla produzione di muco e al rimodellamento tissutale. Attraverso la regolazione di chemochine, geni associati alle immunoglobuline e vie di differenziamento epiteliale, Stat6 contribuisce all’infiammazione allergica e all’iperreattività delle vie aeree ed è spesso studiato nel contesto di modelli di asma e malattie atopiche. La sua attività interseca anche l’immunobiologia del microambiente tumorale e le reti trascrizionali legate alla fibrosi, rendendo Stat6 un nodo utile per la dissezione di vie di segnalazione nella ricerca su immunologia e infiammazione.

Stat6 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Stat6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Stat6 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Stat6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Stat6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Stat6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Stat6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Stat6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Stat6 nelle cellule tumorali con espressione di Stat6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.