Stat3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400027-ACT

O gene humano STAT3 codifica a proteína Stat3, um fator de transcrição citoplasmático latente que é ativado a jusante de receptores de citocinas e de fatores de crescimento por meio da sinalização JAK/STAT. Após a fosforilação, a Stat3 dimeriza e transloca-se para o núcleo para regular programas gênicos que controlam proliferação, sobrevivência, diferenciação, inflamação e função de células imunes, com amplo crosstalk com as vias MAPK e PI3K–AKT. A atividade de STAT3 molda respostas de fase aguda e influencia a transição epitélio–mesênquima, a sinalização angiogênica e a adaptação metabólica em diversos tipos celulares. A desregulação da sinalização de STAT3 está associada a fenótipos inflamatórios e autoimunes e é frequentemente estudada em contextos de reprogramação transcricional oncogênica e de sinalização do microambiente tumoral.

Stat3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STAT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Stat3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STAT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STAT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Stat3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STAT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Stat3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Stat3 em células tumorais com expressão de STAT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.