Stat3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400027-ACT

Das humane STAT3-Gen kodiert Stat3, einen latenten zytoplasmatischen Transkriptionsfaktor, der nachgeschaltet von Zytokin- und Wachstumsfaktorrezeptoren über die JAK/STAT-Signalübertragung aktiviert wird. Nach der Phosphorylierung dimerisiert Stat3 und transloziert in den Zellkern, wo es Genprogramme reguliert, die Proliferation, Überleben, Differenzierung, Entzündung und die Funktion von Immunzellen steuern, mit umfangreichem Crosstalk zu den MAPK- und PI3K–AKT-Signalwegen. Die STAT3-Aktivität prägt Akutphasenreaktionen und beeinflusst in unterschiedlichen Zelltypen die epithelial-mesenchymale Transition, angiogene Signalgebung und metabolische Anpassung. Eine dysregulierte STAT3-Signalgebung ist mit entzündlichen und autoimmunen Phänotypen assoziiert und wird häufig im Kontext onkogener transkriptioneller Reprogrammierung sowie der Signalgebung in der Tumormikroumgebung untersucht.

Stat3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen STAT3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Stat3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des STAT3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der STAT3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Stat3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native STAT3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Stat3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Stat3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem STAT3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.