Stat1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400086-ACT

O STAT1 humano codifica a Stat1, um fator de transcrição central na sinalização de interferon-α/β e interferon-γ, que é ativado por fosforilação mediada por JAK e atua a jusante de receptores de citocinas. Após a ativação, a Stat1 dimeriza e transloca-se para o núcleo para regular genes estimulados por interferon, que controlam a defesa antiviral, a apresentação de antígenos, a apoptose e a restrição do ciclo celular. O STAT1 integra vias imunes inatas e adaptativas, incluindo crosstalk com redes de NF-κB e IRFs, moldando as respostas inflamatórias e a vigilância imunitária. A atividade desregulada de STAT1 está implicada na suscetibilidade a infeções, na inflamação crónica e em contextos de evasão imunitária oncogénica, tornando-o um nó amplamente utilizado para dissecar a sinalização imunitária e programas transcricionais.

Stat1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STAT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Stat1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STAT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STAT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Stat1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STAT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Stat1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Stat1 em células tumorais com expressão de STAT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.