STAMBPL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405119-ACT

STAMBPL1 (proteína semelhante à proteína de ligação a STAM 1) codifica uma desubiquitinase metaloprotease de zinco da família JAMM, que participa da triagem endossomal e da regulação, dependente de ubiquitina, do turnover de proteínas de membrana. Ao modular eventos de desubiquitinação ligados ao tráfego associado ao ESCRT, a STAMBPL1 influencia a internalização de receptores, a atenuação de sinais e a proteostase ao longo das vias endolisossomais. Sua atividade conecta a sinalização por ubiquitina a respostas celulares como o direcionamento de receptores de fatores de crescimento, a dinâmica da sinalização inflamatória e a remodelação adaptativa ao estresse do sistema endomembranar. A desregulação da “edição” por ubiquitina e do tráfego endossomal é amplamente implicada na biologia do câncer, na neurodegeneração e na disfunção imune, tornando a STAMBPL1 um nó relevante para estudos mecanísticos desses processos.

STAMBPL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STAMBPL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

STAMBPL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STAMBPL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STAMBPL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de STAMBPL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STAMBPL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de STAMBPL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via STAMBPL1 em células tumorais com expressão de STAMBPL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.