ST5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411020-ACT

O ST5 humano (suppression of tumorigenicity 5) codifica uma proteína adaptadora multidomínio que modula a transdução de sinal intracelular e processos associados ao citoesqueleto. Foi relatado que o ST5 interage com componentes da sinalização RAS/MAPK e de outras vias responsivas a fatores de crescimento, influenciando a proliferação celular, a diferenciação e as respostas ao estresse de maneira dependente do contexto. Alterações na expressão do ST5 ou no acoplamento às vias foram observadas em diversos cenários de pesquisa relacionados ao câncer e à neurobiologia, associando-o à desregulação da sinalização mitogênica e da homeostase celular. Como resultado, o ST5 é frequentemente estudado por seu papel na integração de sinais, no crosstalk entre vias e na modulação de fenótipos em modelos de células humanas.

ST5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ST5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ST5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ST5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ST5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ST5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ST5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ST5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ST5 em células tumorais com expressão de ST5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.