St3Gal-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422935

概要

マウスの St3gal1 は、ゴルジ体に局在するシアル酸転移酵素 St3Gal-I をコードしており、Galβ1-3GalNAc 構造に α2,3 結合のシアル酸を付加して、シアリル化コア1型 O-グリカンを生成します。ムチン型 O-糖タンパク質のシアリル化状態を規定することで、St3Gal-I は糖鎖を介したタンパク質の安定性、受容体との相互作用、ならびに細胞—細胞／細胞—細胞外マトリックス間相互作用に影響します。この活性は、免疫認識、白血球のトラフィッキング、細胞表面でのシグナル伝達の調節といった、より広範な糖鎖修飾依存的プロセスにも寄与します。ST3GAL1 活性やコア1型 O-グリカンのシアリル化パターンの変化は、炎症や腫瘍に伴う糖鎖リモデリングと関連づけられており、St3gal1 は疾患に関連する糖鎖変化の機序研究に有用な標的となります。

St3Gal-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSt3gal1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、St3gal1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、St3gal1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、St3Gal-Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、St3Gal-Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、St3gal1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• St3Gal-Iの機能に不可欠なSt3gal1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、St3gal1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• St3Gal-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSt3Gal-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、St3gal1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  St3Gal-I HDRプラスミド（m）および St3Gal-I HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSt3gal1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSt3gal1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。