SSTR4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403781-ACT

SSTR4 codifica o receptor de somatostatina 4, um GPCR acoplado a Gi/Go que se liga a peptídeos de somatostatina para modular a atividade da adenilil ciclase e a sinalização subsequente de cAMP/PKA. A ativação do receptor pode influenciar a sinalização MAPK, o fluxo de cálcio e a regulação de canais iônicos, moldando a excitabilidade neuronal e as respostas secretórias de maneira dependente do contexto. O SSTR4 é expresso em diversos tecidos, com papéis de destaque em circuitos neuroendócrinos e sensoriais, nos quais contribui para a regulação da neurotransmissão e de redes de sinalização inflamatória. Alterações na sinalização de receptores de somatostatina, incluindo vias associadas ao SSTR4, são estudadas em distúrbios que envolvem processamento da dor, neuroinflamação e desregulação da sinalização hormonal.

SSTR4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SSTR4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SSTR4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SSTR4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SSTR4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SSTR4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SSTR4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SSTR4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SSTR4 em células tumorais com expressão de SSTR4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.