SSRP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401780-ACT

SSRP1（structure specific recognition protein 1）は、転写伸長、DNA複製、DNA修復の過程でヌクレオソームの解体と再構築を調節するFACT（facilitates chromatin transcription）複合体の中核サブユニットです。SSRP1は、ヒストンシャペロン活性とRNAポリメラーゼIIの進行を協調させることで、クロマチンのアクセス性とゲノム安定性の維持に寄与し、複製ストレス応答やDNA損傷シグナル伝達を制御する経路とも関連づけられています。SSRP1の発現異常やFACT機能の変化は、複数の腫瘍状況において観察される転写プログラムの破綻、増殖、クロマチン構造の変化と関連して報告されています。クロマチン制御因子として、SSRP1はヒト細胞モデルにおける遺伝子発現のエピジェネティック制御、細胞周期進行、ならびに遺伝毒性ストレスに対する感受性機構の研究で頻繁に解析されています。

SSRP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SSRP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SSRP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SSRP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSSRP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SSRP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSSRP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSSRP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSSRP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSSRP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。