Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
SRY Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404342
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- SRY O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico SRY, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:SRY Anticorpo (SRY-15): sc-69842
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
SRY Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404342 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
SRY codifica o fator de transcrição da região determinante do sexo do cromossomo Y, uma proteína de ligação ao DNA do tipo HMG-box que inicia a determinação sexual masculina ao direcionar a diferenciação gonadal precoce para o desenvolvimento de testículos. Ao regular programas transcricionais na gônada bipotencial, o SRY aciona vias a jusante, incluindo a ativação de SOX9 e redes gênicas mais amplas que coordenam o comprometimento da linhagem de células de Sertoli e a supressão de sinais promotores de ovário. A interrupção ou desregulação da função de SRY está associada a distúrbios do desenvolvimento sexual, incluindo disgenesia gonadal 46,XY e fenótipos de reversão sexual, tornando-o um alvo-chave para o estudo do controle transcricional de decisões de destino no desenvolvimento. Em modelos celulares, o SRY serve como um nó acessível para investigar a regulação gênica dependente de cromatina e a atividade de fatores de transcrição que especificam linhagens.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SRY (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SRY em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SRY, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SRY na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SRY.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SRY para a investigação da sinalização de SRY, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SRY críticos para a função SRY
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SRY para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo SRY Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SRY Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SRY. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo SRY Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SRY (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SRY para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SRY definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.