SRp20 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401265-ACT

SRSF3 (SRp20) é um fator de splicing rico em serina/arginina que regula o splicing constitutivo e alternativo de pré-mRNAs, influenciando a definição de éxons e a seleção de sítios de splicing em um amplo conjunto de transcritos. Ao acoplar o processamento de RNA à transcrição e à exportação de mRNA, o SRp20 ajuda a coordenar programas de expressão gênica que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e respostas ao estresse. Sua atividade contribui para a regulação em nível de vias em redes de metabolismo de RNA, incluindo a função do spliceossomo e o controle pós-transcricional de transcritos que codificam reguladores de sinalização e de cromatina. A desregulação da expressão de SRSF3 ou de sua atividade de splicing tem sido associada a paisagens aberrantes de isoformas observadas no câncer e em outros distúrbios marcados por processamento de RNA alterado, reforçando sua relevância para estudos mecanísticos de fenótipos dependentes de splicing.

SRp20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SRSF3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SRp20 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SRSF3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SRSF3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SRp20. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SRSF3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SRp20 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SRp20 em células tumorais com expressão de SRSF3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.