SR-4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403373-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- SR-4O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase SR-4 (h) e o Plasmídeo Double Nickase SR-4 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para HTR4. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:SR-4 Anticorpo (G-3): sc-376158
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
SR-4 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403373-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SR-4 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403373-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HTR4 codifica o receptor humano de 5-hidroxitriptamina 4 (SR-4), um receptor acoplado à proteína G que se acopla principalmente à Gs para estimular a adenilil ciclase, elevar os níveis de cAMP e ativar programas de sinalização dependentes de PKA e de EPAC. Por meio dessas vias, o SR-4 pode modular a liberação de neurotransmissores, a excitabilidade neuronal e processos epiteliais de secreção e motilidade, integrando sinais serotoninérgicos com redes de fosforilação a jusante e com a expressão gênica. A atividade de HTR4 interage com circuitos mais amplos de sinalização serotoninérgica e de nucleotídeos cíclicos que moldam a plasticidade sináptica e a fisiologia neurogastrointestinal. A desregulação da sinalização associada a HTR4 tem sido investigada no contexto de distúrbios que envolvem o tônus serotoninérgico e a regulação da motilidade, sustentando sua relevância como um nó mecanístico em estudos focados em vias.
SR-4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HTR4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HTR4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HTR4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HTR4 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.