SR-2B Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420994-ACT

O Htr2b de camundongo codifica o receptor de serotonina SR-2B (5-HT2B), um receptor acoplado à proteína G que sinaliza principalmente via Gq/11 para ativar a fosfolipase C, promover o turnover de fosfatos de inositol, a mobilização intracelular de Ca²⁺ e programas transcricionais a jusante mediados por PKC/ERK. O SR-2B modula a sinalização serotoninérgica neuromodulatória e periférica que influencia a excitabilidade neuronal, o tônus vascular e respostas de remodelamento tecidual. Alterações na atividade de Htr2b têm sido associadas a saídas desreguladas de vias da serotonina relevantes para fenótipos neurocomportamentais, processos de remodelamento cardiovascular e pulmonar e contextos de sinalização inflamatória. Como um nó receptor de membrana, o SR-2B oferece um ponto de entrada acessível para estudar expressão gênica dirigida por receptores, acoplamento a segundos mensageiros e o “cross-talk” de vias com redes dependentes de MAPK e de cálcio.

SR-2B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Htr2b sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SR-2B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Htr2b em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Htr2b, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SR-2B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Htr2b nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SR-2B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SR-2B em células tumorais com expressão de Htr2b silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.