Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Squalene epoxidase Double Nickaseプラスミド (h): sc-402870-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Squalene epoxidase Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Squalene epoxidaseダブルニカースプラスミド（h）およびSqualene epoxidaseダブルニカースプラスミド（h2）は、SQLEを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Squalene epoxidase 抗体 (H-6): sc-271651
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Squalene epoxidase Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402870-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Squalene epoxidase Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402870-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SQLEはスクアレンエポキシダーゼをコードしており、これはフラビン依存性モノオキシゲナーゼとしてスクアレンを2,3-オキシドスクアレンへとエポキシ化する反応を触媒する。この反応はコレステロールおよびステロール生合成における初期の速度決定に影響する段階である。小胞体関連酵素として、SQLEはステロール恒常性の調節に寄与し、メバロン酸経路のフラックス、脂質滴の動態、膜組成のフィードバック制御と統合的に関わる。SQLE活性の撹乱は細胞内脂質プロファイルを再編し、シグナル伝達の足場やストレス下での代謝適応に影響を及ぼし得る。SQLEを介したステロール生合成制御の変化は、脂質異常症に関連する表現型や、複数の疾患状況で観察される代謝リプログラミングと関連づけられており、脂質代謝研究における機構的ハブ（結節点）としての有用性を支持している。
Squalene epoxidase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SQLE 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SQLE内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SQLEの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SQLEが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。