SPRED2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404738

Visão geral

SPRED2 (sprouty related EVH1 domain containing 2) codifica uma proteína adaptadora citosólica que regula negativamente a sinalização de receptores tirosina-quinase ao inibir a cascata Ras–Raf–MEK–ERK/MAPK. Por meio de interações com componentes como Raf e neurofibromina, a SPRED2 ajuda a limitar a proliferação, a diferenciação e a sinalização inflamatória induzidas por fatores de crescimento, contribuindo para o controle homeostático das respostas celulares. Alterações na expressão ou na função de SPRED2 têm sido associadas à atividade desregulada de MAPK na biologia do câncer e a processos imunes e inflamatórios, inclusive em contextos que envolvem sinalização aberrante de citocinas e quimiocinas. Como um “freio” da via, SPRED2 é frequentemente estudada por seu papel em ajustar a amplitude e a duração da sinalização a jusante de RTKs e de outras entradas a montante que convergem em ERK.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SPRED2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SPRED2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SPRED2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SPRED2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SPRED2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SPRED2 para a investigação da sinalização de SPRED2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SPRED2 críticos para a função SPRED2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SPRED2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SPRED2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SPRED2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SPRED2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SPRED2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SPRED2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SPRED2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SPRED2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.