SPRED1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402981

Visão geral

A SPRED1 (proteína 1 contendo domínio EVH1 relacionada a sprouty) é um regulador negativo da sinalização de receptores tirosina-quinase que restringe a cascata Ras–RAF–MEK–ERK/MAPK ao se acoplar ao complexo Ras-GAP da neurofibromina (NF1). Ao limitar a ativação de ERK dependente de fatores de crescimento, a SPRED1 influencia a proliferação, a diferenciação e a migração celular em múltiplos contextos teciduais. Variantes de perda de função em SPRED1 estão associadas à síndrome de Legius e a alterações de pigmentação e características do neurodesenvolvimento, e a atividade reduzida de SPRED1 pode impactar a amplitude da via MAPK em redes de sinalização relevantes para o câncer. Assim, a SPRED1 é amplamente estudada em modelos de biologia das rasopatias, programas transcricionais dirigidos por ERK e controle por retroalimentação da sinalização mitogênica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SPRED1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SPRED1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SPRED1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SPRED1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SPRED1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SPRED1 para a investigação da sinalização de SPRED1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SPRED1 críticos para a função SPRED1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SPRED1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SPRED1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SPRED1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SPRED1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SPRED1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SPRED1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SPRED1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SPRED1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.