SPPL2b CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405646

概要

SPPL2B は、エンドソームおよびリソソーム膜に局在する、シグナルペプチドペプチダーゼ様（signal peptide peptidase–like）ファミリーに属する膜内アスパラギン酸プロテアーゼである SPPL2b をコードします。SPPL2b は制御された膜内プロテオリシスに関与し、エンド・リソソーム系における膜タンパク質のターンオーバーやペプチド断片の生成を調節します。これらの作用を通じて、SPPL2b は小胞輸送、受容体プロセシング、ならびに免疫・炎症経路に関連する下流シグナル伝達に影響を与え得る位置づけにあります。膜内プロテオリシスやエンドリソソーム機能の破綻は、神経変性、免疫細胞の恒常性、膜タンパク質の品質管理に関する研究において重要なテーマです。

SPPL2b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPPL2B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPPL2B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPPL2Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPPL2bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPPL2bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPPL2B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPPL2bの機能に不可欠なSPPL2Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPPL2Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPPL2b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSPPL2b CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPPL2B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPPL2b HDRプラスミド（h）および SPPL2b HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPPL2Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPPL2B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。