SPNS2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432145-ACT

O gene **Spns2** de camundongo codifica a **SPNS2**, um transportador de membrana multipasse que exporta **esfingosina-1-fosfato (S1P)** para estabelecer gradientes extracelulares de S1P que moldam a sinalização dos receptores de S1P. Ao controlar a disponibilidade de S1P, a SPNS2 influencia o tráfego de linfócitos, a regulação da barreira endotelial, sinais angiogênicos e o recrutamento de células inflamatórias dentro da rede metabólica mais ampla de esfingolipídios. A perturbação do transporte de S1P mediado por SPNS2 tem sido associada a alterações na homeostase imune e na biologia vascular, tornando **Spns2** um ponto útil para estudar imunorregulação, fenótipos associados à inflamação e sinalização do microambiente. Em modelos murinos, a atividade de **Spns2** é comumente investigada no contexto do fluxo de S1P específico de tecido, da saída (egresso) de células imunes e de vias de desenvolvimento vascular.

SPNS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Spns2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SPNS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Spns2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Spns2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SPNS2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Spns2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SPNS2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SPNS2 em células tumorais com expressão de Spns2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.