Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
SphK1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423102
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- SphK1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico SphK1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:SphK1 Anticorpo (G-11): sc-365401
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
SphK1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423102 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Sphk1 codifica a esfingosina quinase 1 (SphK1), uma quinase lipídica essencial que fosforila a esfingosina para gerar esfingosina-1-fosfato (S1P), modulando assim o equilíbrio entre o S1P pró-sobrevivência e os reservatórios pró-apoptóticos de ceramida/esfingosina. A sinalização de S1P impulsionada por SphK1 cruza-se com vias de GPCR e de receptores tirosina-quinase, influenciando MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF-κB, fluxo de cálcio e remodelação do citoesqueleto, que em conjunto regulam proliferação, resistência à apoptose, migração e respostas inflamatórias. Em sistemas murinos, SphK1 é amplamente utilizada para investigar o metabolismo de esfingolipídios bioativos na regulação imune, na biologia vascular e em respostas ao estresse, incluindo modelos de inflamação, fibrose e fenótipos relacionados ao câncer. Alterações na atividade do eixo SPHK1/S1P são frequentemente associadas à produção desregulada de citocinas, à função de barreira e à sinalização associada a tumores, tornando-o um nó relevante para estudos mecanísticos de vias.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SphK1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sphk1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sphk1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sphk1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SphK1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sphk1 para a investigação da sinalização de SphK1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sphk1 críticos para a função SphK1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sphk1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo SphK1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo SphK1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sphk1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo SphK1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR SphK1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sphk1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sphk1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.