SPARC Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-423101-LAC

O gene **Sparc** de camundongo codifica a **SPARC** (*secreted protein acidic and rich in cysteine*), uma glicoproteína matricelular que modula a organização da matriz extracelular (MEC), a deposição de colágeno e a adesão célula–matriz, sem atuar como um componente estrutural primário. A SPARC influencia a remodelação tecidual ao regular a sinalização de fatores de crescimento e vias dependentes de integrinas que moldam a migração, a proliferação e a diferenciação celulares, e está ligada a programas de angiogênese e reparo de feridas. A alteração da expressão de SPARC associa-se à fibrose, a microambientes inflamatórios e a interações tumor–estroma, tornando-a um ponto útil para estudar fenótipos impulsionados pela MEC em modelos de desenvolvimento e doença.

As Partículas de Ativação Lentivirais SPARC (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Sparc numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais SPARC (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Sparc, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de SPARC. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Sparc e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.