SPAG17 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410482-ACT

SPAG17 (antígeno 17 associado ao esperma) codifica uma proteína de andaime associada a microtúbulos, necessária para a arquitetura axonemal adequada e para a função de cílios móveis. Contribui para a montagem e a estabilidade do complexo do par central e para as interações com os raios radiais que coordenam o batimento impulsionado por dineína, ligando o SPAG17 à organização do citoesqueleto e às vias de ciliogênese. Na biologia humana, alterações na expressão ou na função de SPAG17 estão associadas a defeitos na motilidade ciliar, que podem afetar a biologia reprodutiva e outros tecidos dependentes de cílios. Como fator regulador de cílios/flagelos, SPAG17 é um gene marcador útil para investigar programas transcricionais que governam motilidade, diferenciação e dinâmica de microtúbulos.

SPAG17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SPAG17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SPAG17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SPAG17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SPAG17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SPAG17. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SPAG17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SPAG17 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SPAG17 em células tumorais com expressão de SPAG17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.